Određivanje optimalnih uvjeta aktivnosti proteina YblCcw12p eksprimiranog u kvascu Saccharomyces cerevisiae

završni rad

• Naslov (engleski): Determination of optimal conditions for activity of protein YblCcw12p expressed in yeast Saccharomyces cerevisiae
• Autor: Blanka Didak
• Mentor: Renata Teparić (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za kemiju i biokemiju); (Laboratorij za biokemiju); Zagreb
• Datum i država obrane: 2011-06-29, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

U posljednje vrijeme raste interes za biotehnološku primjenu enzima imobiliziranih na površinu stanica domaćina koja tada ujedno djeluje kao producent i nosač imobiliziranog enzima. Od posebne važnosti su heterologni proteini vezani na staničnu stijenku kvasca Saccharomyces cerevisiae, budući da je kvasac nepatogeni mikroorganizam koji se lako transformira i uzgaja, a kao eukariot je pogodniji za ekspresiju enzima sisavaca nego bakterijske stanice. U ovom radu je karakterizirana enzimska aktivnost rekombinantne nukleaze YblCcw12p koja je dobijena fuzijom gena za intracelularnu nukleazu kvasca Yblp i gena za protein stanične stijenke Ccw12p preko kojeg je onda rekombinantni protein usidren u stijenku. U radu je pokazano da je rekombinantni enzim uspješno imobiliziran na površini stanice i da ima nukleaznu aktivnost. Za detekciju enzimske aktivnosti korištene su elektroforeza i SRED metoda koje su detaljno opisane u radu. Nadalje je provedena optimizacija metode za mjerenje enzimske aktivnosti modificiranjem metode po Kunitz-u, te su određeni optimalni uvijeti za aktivnost rekombinantnog enzima.

Sažetak (engleski)

In the past decade interest is growing for the display of heterologous proteins on the surface of microorganisms, serving at the same time as producers and carriers of immobilized enzymes. Saccharomyces cerevisiae, as nonpathogenic microorganism which is easily transformed, cultivated, and better host for expression of mammalian enzymes than bacterial cells, has special importance in this field of biotechnology. In this work enzyme activity of recombinant nuclease YblCcw12p is detected and partially characterized. YblCcw12p is made by fusion of gene for yeast intracellular nuclease Yblp and gene for cell wall protein Ccw12p. Results presented in this work showed that recombinant enzyme is successfully immobilized on surface of the cell and posses nuclease activity. Electrophoresis and SRED method were used for detection of enzyme activity. Furthermore, enzyme activity was measured and optimal conditions for activity of recombinant protein were determined by modified and optimized Kunitz method.

• Ključne riječi: rekombinantni protein; DNazna aktivnost; Saccharomyces cerevisiae
• Ključne riječi (engleski): recombinant proteins; DNase activity; Saccharomyces cerevisiae
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:452223
• Studijski program: Naziv: Biotehnologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: preddiplomski; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) inženjer/inženjerka biotehnologije (univ. bacc. ing. biotechn)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-05-19 08:00:23