Uvođenje točkastih mutacija i njihov utjecaj na aktivnost lakaze CtLcc1 izložene na staničnoj stijenci kvasca Saccharomyces cerevisiae

završni rad

• Naslov (engleski): Introduction of point mutations and their effect on the activity of laccase CtLcc1 displayed on the cell wall of the yeast Saccharomyces cerevisiae
• Autor: Paola Franković
• Mentor: Bojan Žunar (mentor)
• Mentor: Antonia Paić (pomoć pri izradi, neposredni voditelj)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za kemiju i biokemiju); (Laboratorij za biokemiju); Zagreb
• Datum i država obrane: 2024-09-10, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

Lakaze su bakar-ovisne polifenol oksidaze primjenjive u bioremedijaciji te prehrambenoj, tekstilnoj i farmaceutskoj industriji. Međutim, za povećanje ekonomske isplativosti ovih procesa, potrebno je razviti mikrobne proizvodne sojeve koji sintetiziraju aktivnije lakaze. U tu svrhu, prethodno je u Laboratoriju za biokemiju razvijen soj kvasca Saccharomyces cerevisiae koji efikasno izlaže lakazu CtLcc1 na površinu svoje stanične stijenke. U ovom radu konstruirano je šest novih inačica lakaze CtLcc1 izloženih na površinu stanične stijenke kvasca koje nose točkaste mutacije za koje je poznato da dovode do povećanja aktivnosti sličnih lakaza. Nakon konstrukcije odgovarajućih plazmida, sojevi kvasca S. cerevisiae koji eksprimiraju nove inačice lakaza nacijepljeni su na selektivnu podlogu s kromogenim supstratima ABTS i DMP te je procijenjena njihova lakazna aktivnost preko promjene boje kolonija. Rezultati su pokazali da su novouvedene mutacije uspješno modulirale aktivnost lakaze, iako nijedna od novih inačica nije nadmašila aktivnost izvornog enzima CtLcc1.

Sažetak (engleski)

Laccases are copper-dependent polyphenol oxidases applicable in bioremediation and the food, textile and pharmaceutical industries. To improve the economic viability of these processes, it is necessary to develop microbial production strains that synthesise more active laccases. For this purpose, a strain of yeast Saccharomyces cerevisiae that efficiently displays laccase CtLcc1 on the surface of its cell wall was previously developed in the Laboratory for Biochemistry. In this study, six new variants of laccase CtLcc1 were constructed, carrying point mutations known to increase the activity of similar laccases. After constructing the plasmids, S. cerevisiae strains expressing the new laccase variants were inoculated on selective media containing chromogenic substrates ABTS and DMP, and their laccase activity was assessed based on the colony colour change. The results demonstrated that the introduced mutations successfully modulated laccase activity, although none of the new variants outperformed the activity of the original CtLcc1 enzyme.

• Ključne riječi: lakaza CtLcc1; kvasac Saccharomyces cerevisiae; stanična stijenka; izlaga nje proteina na površinu stanične stijenke; ABTS
• Ključne riječi (engleski): laccase CtLcc1; yeast Saccharomyces cerevisiae; cell wall; protein surface display on the cell wall; ABTS
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:013947
• Studijski program: Naziv: Biotehnologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: preddiplomski; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) inženjer/inženjerka biotehnologije (univ. bacc. ing. biotechn)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2024-09-23 10:10:47