Sinteza fragmenta DNA za inaktivaciju gena RAD27 lančanom reakcijom polimerazom

završni rad

• Naslov (engleski): Synthesis of a DNA fragment by polymerase chain reaction used for inactivation of the gene RAD27
• Autor: Davor Nestić
• Mentor: Ivan-Krešimir Svetec (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biologiju i genetiku mikroorganizama); Zagreb
• Datum i država obrane: 2013-09-13, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

Cilj ovoga rada je umnažanje linearnog fragmenta DNA rad27::kanMX4 lančanom reakcijom polimerazom iz kvasca Saccharomyces cerevisiae. Fragment rad27::kanMX4 se zahvaljujući krajevima homolognima dijelu gena RAD27 i selektivnom biljegu kanMX4 moţe koristiti za inaktivaciju gena RAD27 u drugim sojevima kvasca mehanizmom rekombinacije „end-out“ (zamjena gena). Nakon izolacije genomske DNA kvasca, provedena je gel-elektroforeza radi provjere uspješnosti izolacije te je izolirana DNA poslužila kao kalup za sintezu fragmenta lančanom reakcijom polimerazom. Gel-elektroforezom provjerena je uspješnost sinteze fragmenta, a struktura umnoženog fragmenta provjerena je restrikcijskom analizom pomoću tri restrikcijska enzima. Veličina dobivenih fragmenata nakon cijepanja restrikcijskim enzimima bila je u skladu s restrikcijskom mapom fragmenta rad27::kanMX4.

Sažetak (engleski)

The objective of this project was the amplification of a linear DNA fragment rad27::kanMX4 by polymerase chain reaction (PCR) from the yeast Saccharomyces cerevisiae genome. The rad27::kanMX4 fragment carries a kanMX4 selection marker and it’s ends are homologous to yeast RAD27 gene. Hence, it can be used for transformation and inactivation of RAD27 gene in yeast via the „ends-out” recombination (gene replacement). After isolating the yeast genomic DNA, a gel electrophoresis was used to verify the success of the isolation. The isolated DNA served as a template for the PCR reaction, and gel electrophoresis was carried out to verify the success of the amplification. Three restriction enzymes were used for the restriction analysis, which determined that the structure of the amplified rad27::kanMX4 fragment is in accordance with the restriction map.

• Ključne riječi: Saccharomyces cerevisiae; lančana reakcija polimerazom; homologna rekombinacija; zamjena gena.
• Ključne riječi (engleski): Saccharomyces cerevisiae; polymerase chain reaction; homologous recombination; gene replacement
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:985031
• Studijski program: Naziv: Biotehnologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: preddiplomski; Akademski / stručni naziv: sveučilišni/a prvostupnik/prvostupnica (baccalaureus/baccalaurea) inženjer/inženjerka biotehnologije (univ. bacc. ing. biotechn)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-05-04 08:35:14