Pročišćavanje i stabilnost 5'-fosfodiesteraze iz sladnih klica

diplomski rad

• Naslov (engleski): Purification and stability of barley malt sprouts 5'-phosphodiesteraze
• Autor: Tamara Jakupec
• Mentor: Sunčica Beluhan (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2006-03-13, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

U ovom je radu 5'-fosfodiesteraza (EC 3.1.4.1) iz sladnih klica ekstrahirana prekonoćnim suspendiranjem u Tris-HCl puferu pH 8,9 pri 37 °C. Djelomično pročišćavanje sirovog enzimskog pripravka je provedeno taloženjem acetonom u dva stupnja. Nakon dijalize, enzimski pripravak je pročišćavan kromatografijom na ionskim izmjenjivačima - S-Sepharose i DEAE-Sepharose. Eluacija je vršena Na-acetatnim puferom pH 5,5, odnosno pH 3,5. Enzim je pročišćen 101,11 puta i postigao je specifičnu aktivnost od 81,9 U/mg proteina. Elektroforezom na SDS-poliakrilamidnom gelu je potvrđeno da je 5'-fosfodiesteraza trimerni enzim sastavljen od podjedinica čije su molarne mase 56, 43 i 26 kDa. Ovaj je enzim pokazao izrazitu stabilnost tijekom 8 dana pohranjivanja pri + 4 °C i inkubaciji pri 37, 55 i 70 °C tijekom 60, 90 i 120 minuta.

Sažetak (engleski)

In this work, 5'-phosphodiesterase (EC 3.1.4.1) from malt sprouts, overnight extracted in Tris-HCl buffer pH 8.9 at 37 oC, has been purified. Acetone precipitation up to 60 % (vol/vol), dialysis, ion exchange chromatography (S-Sepharose and DEAE- Sepharose), and SDS-PAGE, were steps of the purification sequence. The columns were eluated with Na-acetate buffers pH 5.5 and 3.5. The 5'-phosphodiesterase from malt sprouts was purified 101.11 folds with specific activity of 81.9 U/mg protein. SDS-PAGE revealed that the enzyme molecule is composed of three subunits; 56, 43, and 26 kDa. Final enzyme preparation had an excellent storage stability, at + 4 oC for 8 days and at 37, 55 and 70 oC, respectively, for 60, 90 and 120 min.

• Ključne riječi: sladne klice; 5'-fosfodiesteraza; pročišćavanje proteina; stabilnost enzima
• Ključne riječi (engleski): malt sprouts; 5'-phosphodiesterase; protein purification; enzyme stability
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:751961
• Studijski program: Naziv: Biotehnologija; smjerovi: Biokemijsko-mikrobiološki; Smjer: Biokemijsko-mikrobiološki; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: dodiplomski; Akademski / stručni naziv: diplomirani inženjer biotehnologije; smjer biokemijsko-mikrobiološki (dipl. ing. bioteh.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-09-11 07:53:15