Karakterizacija 5'-fosfodiesteraze iz sladnih klica

diplomski rad

• Naslov (engleski): Characterization of purified 5´-phosphodiesterase from malt sprouts
• Autor: Andrea Jelić
• Mentor: Sunčica Beluhan (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2005-12-13, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

U ovom radu je provedena karakterizacija potpuno pročišćene 5´-fosfodiesteraze, nakon što je ekstrahirana iz sladnih klica u Tris-HCl puferu pH 8,9 te dalje pročišćena dijalizom, ionskom izmjenom i gel elektroforezom. Karakterizacija je provedena ispitivanjem utjecaja dvovalentnih kationa, EDTA i NaN3, temperature i pH vrijednosti na aktivnost enzma. Također je ispitivana supstratna specifičnost, kao i inhibicija produktima hidrolize, 5´-ribonukleotidima (5´-AMP, 5´-GMP, 5´-UMP, 5´-CMP i 5´-IMP). Potpuno pročišćeni enzim imao je pH optimum 8,9, te je pokazao maksimalnu aktivnost pri 70 °C. Također je najveću aktivnost pokazao dodatkom 10 mM Mg2+ iona, dok su mu Zn2+, Cu2+ i Mn2+ ioni, EDTA i NaN3 smanjili aktivnost. Izolirana 5´-fosfodiesteraza je pokazala Km vrijednost 0,28 mM za timidin 5´-monofosfat p-nitrofenil ester (supstrat za 5´-fosfodiesterazu). Nadalje, enzim je pokazao iznimnu sposobnost hidrolize RNA i jednolančane DNA, te vrlo slabi afinitet prema dvolančanoj DNA.

Sažetak (engleski)

In this work 5´-phosphodiesterase from malt sprouts was extracted in Tris-HCl buffer pH 8,9, and then was purified by dialysis, ion exchange and SDS-PAGE, and further on characterized. Purified enzyme had an optimum pH of 8,9 and maximum activity at 70 °C. In the presence of 10 mM Mg2+ ions, increased activity was noted, while Zn2+, Cu2+ and Mn2+ ions, EDTA , NaN3 and 5´-ribonucleotides (5´-AMP, 5´-GMP, 5´-UMP, 5´-CMP and 5´-IMP) decreased the enzyme activity. It had a Km of 0,28 mM on the hydrolysis of thymidine 5´-monophosphate p-nitrophenyl. This enzyme was able to hydrolyze RNA and single stranded DNA, whereas double stranded DNA was not a good substrate.

• Ključne riječi: 5´-fosfodiesteraza; sladne klice
• Ključne riječi (engleski): 5´-phosphodiesterase; malt sprouts
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:781533
• Studijski program: Naziv: Biotehnologija; smjerovi: Biokemijsko inženjerstvo; Smjer: Biokemijsko inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: dodiplomski; Akademski / stručni naziv: diplomirani inženjer biotehnologije; smjer biokemijsko inženjerstvo (dipl. ing. bioteh.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-09-11 13:31:18