Višestupanjska enzimska sinteza nukleotidno-aktiviranih šećera

diplomski rad

• Naslov (engleski): Multistep enzymatic synthesis of nucleotide-activated sugars
• Autor: Doroteja Horvat
• Mentor: Anita Slavica (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2014-10-03, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

UDP-glukoza sintetizirana je četverostupanjskom reakcijom i dalje, kao supstrat, korištena u proizvodnji UDP-glukuronske kiseline. Označavanje UDP-glukoze izotopima nije imalo utjecaja na ovu reakciju i slični prinosi proizvoda dobiven su s neoznačenim i označenim supstratom. Iako se UDP-glukoza proizvela u trećoj reakciji, provedena je četverostupanjska reakcija. Četvrta reakcija u nizu je provedena jer pirofosfat utječe na prinos UDP-glukoze. Uklanjanje pirofosfata pomaknulo je ravnotežu reakcije prema sintezi UDP-glukoze. Sinteza UDP-glukoze bila je vrlo učinkovita uz prinos proizvoda između 86-99%. Konverzija UDP-glukoze u UDP-glukuronsku kiselinu pomoću humane UDP-glukoza dehidrogenaze provedena je uz prinos od oko 100%. Proizvedena UDP-glukuronska kiselina je pročišćena kao amonijeva sol te kao natrijeva sol. Obje soli korištene su u reakciji koju katalizira UDP-apioza/ksiloza sintaza (AXS). U reakciji s amonijevom solju manje UDP-apioze je nastalo nego u reakciji s natrijevom solju. AXS je jednako koristila sve testirane supstrate, neoznačene i označene UDP-glukuronske kiseline.

Sažetak (engleski)

Four-step synthesis of UDP-Glc was performed and synthesized UDP-Glc was used as substrate in production of UDP-GlcUA. In the synthesis of UDP-Glc, isotope-labeling did not have any influence on the reaction and similar yields were obtained with unlabeled and labeled UDP-Glc. Although UDP-Glc was produced in the 3rd reaction, four-step reaction was performed. Since pyrophosphate affects yield of produced UDP-Glc, 4threaction was performed. Removal of a pyrophosphate dragged equilibrium toward UDP-Glc synthesis. Synthesis of UDP-Glc was very successful with theoretical yield between 86-99%. Conversion of UDP-Glc into UDP-GlcUA by human UDP-glucose dehydrogenase was performed with yield of approximately 100%. Produced UDP-GlcUA was purified as ammonium salt and exchanged into sodium salt. Both salts were used for reaction catalyzed by UDP-apiose/xylose synthase (AXS). In AXS catalyzed reaction with ammonium salt less UDP-Api was formed than in the reaction with sodium salt. AXS accepted all substrates, unlabeled and labeled UDP-GlcUA.

• Ključne riječi: sinteza UDP-glukoze; proizvodnja UDP-glukuronske kiseline; pročišćavanje UDP-glukuronske kiseline; reakcija UDP-apioza/ksiloza sintaze
• Ključne riječi (engleski): synthesis of UDP-glucose; production of UDP-glucuronic acid; UDP-glucuronic acid purification; UDP-Api/Xyl synthase reaction
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:603215
• Studijski program: Naziv: Molekularna biotehnologija; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka molekularne biotehnologije (mag. ing. biotechn.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Pristup korisnicima matične ustanove
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-05-02 12:40:49