Unošenje mutacija u gen SCW4 kvasca Saccharomyces cerevisiae i ispitivanje utjecaja uvedenih mutacija na vezanje Scw4 proteina u staničnu stijenku

diplomski rad

• Naslov (engleski): Introduction of mutations in the SCW4 gene of the yeast Saccharomyces cerevisiae and investigation of the influence of introduced mutations on binding of Scw4 protein in the cell wall
• Autor: Dora Hrestak
• Mentor: Renata Teparić (mentor)
• Član povjerenstva: Vladimir Mrša (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za kemiju i biokemiju); (Laboratorij za biokemiju); Zagreb
• Datum i država obrane: 2021-01-15, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

Scw4 protein u stijenku kvasca Saccharomyces cerevisiae veže se kovalentnim i neokovalentnim vezama, međutim, točan mehanizam kovalentnog povezivanja i dalje je nepoznat. Polazišna je pretpostavka da je način vezanja sličan onome PIR proteina, s obzirom na jednak način ekstrakcije kovalentno vezane frakcije ovog proteina iz stijenke. Cilj ovog istraživanja bio je odrediti koja je aminokiselina odgovorna za kovalentno vezanje Scw4 u stijenku kvasca. U ciljanu regiju gena SCW4 uvedene su mutacije, a uzgoj mutanata proveden je u nepuferiranom mediju, te pri pH=4 i pH=7. Nakon uzgoja nekovalentno vezani proteini su izolirani iz stijenki pomoću vrućeg SDS-a, a kovaletno vezani pomoću 30 mM NaOH. Dobiveni proteinski ekstrakti analizirani su Western blot metodom. Iz dobivenih rezultata možemo zaključiti kako je za kovalentno vezanje Scw4 u stijenku S. cerevisiae odgovoran ostatak glutamina Q₂₄₁.

Sažetak (engleski)

The Scw4 protein of Saccharomyces cerevisiae yeast can be bound both covalently and non-covalently to the cell wall, however, the exact mechanism of covalent binding is still unknown. The initial assumption is that the binding mechanism is similar to that of PIR proteins, given the same method of extraction of covalently bound fraction of these proteins from the yeast cell wall. The aim of this study was to determine which amino acid is responsible for covalent binding of Scw4 to the yeast wall. Mutations were introduced into the target region of the SCW4 gene, followed by the cultivation in an unbuffered medium, as well as at pH=4 and pH=7. After cultivation, non-covalently bound proteins were isolated by hot SDS, while covalently bound proteins were extracted by 30 mM NaOH. Protein extracts were analyzed by the Western blot method. The obtained results showed that glutamine Q₂₄₁ is responsible for covalent binding of Scw4 to the cell wall of S. cerevisiae.

• Ključne riječi: japsinske proteaze; Kex2 proteaza; stanična stijenka; Saccharomyces cerevisiae; Scw4
• Ključne riječi (engleski): cell wall; Kex2 protease; Saccharomyces cerevisiae; Scw4; Yapsins
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:593938
• Studijski program: Naziv: Bioprocesno inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka bioprocesnog inženjerstva (mag. ing. bioproc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2021-03-17 12:38:14