Pročišćavanje i karakterizacija novog fungalog ekstracelularnog enzima

diplomski rad

• Naslov (engleski): Purification and characterization of a new fungal extracellular enzyme
• Autor: Tanja Lešić
• Mentor: Božidar Šantek (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2016-12-01, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

Enzim celobioza dehidrogenaza iz Corynascus thermophilus (CtCDH) je eksprimiran u Aspergillus niger. Najbolji transformant je odabran za provjeru proizvodnje enzima, te za proizvodnju u Erlenmajerovim tikvicama. Ispitivanja tijekom proizvodnje pokazala su sličnost s divljim tipom CtCDH dok je CtCDH eksprimiranim u kvascu Pichia pastoris pokazao nižu specifičnu aktivnost. Enzim je pročišćen u dva stupnja. Molekularna masa iznosi 90 kDa. Kinetičke konstante enzima CtCDH su više u usporedbi s vrijednostima objavljenim za divlji tip CtCDH kao i za CtCDH exprimiran u Pichia pastoris. Enzimu CDH je također testirana sposobnost in situ proizvodnje H2O2 u reakciji s enzimom nespecifična peroksigenaza kako bi se uspostavio ekološki prihvatljiv proces oksidacije etilbenzena. U tu svrhu su testirani različiti CDH varijanti iz Myriococcum thermophilum sa povećanim afinitetom prema kisiku. Varijant N748G/ T750Q se pokazao kao najučinkovitiji. Ograničavajući faktor u primjeni ovakve vrste je stabilnost enzima, na što se buduća istraživanja moraju orijentirati.

Sažetak (engleski)

Cellobiose dehydrogenase from Corynascus thermophilus (CtCDH) was cloned into Aspergillus niger for heterologous expression. The best transformant selected for screening was also selected for the enzyme production in Erlenmeyer flasks. During the production, the recombinant CtCDH showed similar characteristics to the wild-type CtCDH, whereas CtCDH produced in Pichia pastoris shows a lower specific activity. The expressed enzyme was purified in two-step procedure. The molecular mass was ~90 kDa. Kinetic constants of CtCDH were higher compared to the wild-type CtCDH and the one expressed in Pichia pastoris. CDH was also tested for its ability of the in situ production of H2O2 and it was combined with unspecific peroxygenase to establish an eco-friendly process for ethylbenzene oxidation. For that purpose, different CDH variants from Myriococcum thermophilum with increased oxygen reactivity have been tested. The variant N748G/ T750Q was found to be most efficient. A limiting factor in application of this type seems to be the enzyme's stability on which further research must focus.

• Ključne riječi: celobioza dehidrogenaza; Aspergillus niger; karakterizacija; primjena CDH; ekološki prihvatljiv proces oksidacije etilbenzena
• Ključne riječi (engleski): cellobiose dehydrogenase; Aspergillus niger; characterization; CDH application; ecofriendly process of ethylbenzene oxidation
• Jezik: engleski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:929199
• Studijski program: Naziv: Bioprocesno inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka bioprocesnog inženjerstva (mag. ing. bioproc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2017-04-24 10:23:51