Improvement of plasmid stability in E. coli for industrial production

diplomski rad

• Naslov (engleski): Povećanje stabilnosti plazmida u E. coli za industrijsku proizvodnju
• Autor: Lukrecija Vlahović
• Mentor: Božidar Šantek (mentor)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2018-10-26, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

E. coli is most common host for recombinant protein production. Majority of the expression systems based on it depend on attendance of at least one plasmid that needs to be segregated into dividing cells during growth. Segregational plasmid stability is one of the major issues of industrial scale production of recombinant proteins during which conventional method of adding antibiotics should be excluded. One of the alternatives is to use auxotrophic mutants transformed with plasmid that contains gene of interest and gene that complements the mutation. In this thesis mutant strain of E coli with deleted gene for triosephosphate isomerase, transformed with plasmid which complements mutation and has resistance to antibiotic, is used. Its growth and segregational stability of the plasmid is compared to the transformed parent strain, cultivated in medium with and without antibiotic. In addition, new auxotrophic strain, with lower probability of creating revertants is created.

Sažetak (hrvatski)

E. coli je najčešći domaćin za proizvodnju rekombinantnih proteina. Većina ekspresijskih sistema baziranih na njoj ovisi o pristutnosti barem jednog plazmida koji se treba pravilno rasporediti u stanice kćeri tijekom diobe. Segregacijska stabilnost plazmida je jedan od najvećih problema tijekom industrijske proizvodnje rekombinantnih proteina tijekom koje je potrebno izbjeći uobičajenu metodu dodatka antibiotika kulturi, a jedan od alternativnih načina je upotreba auksotrofnih mutanata transformiranih plazmidom koji uz gen od interesa sadrži gen koji komplementira mutaciju soja. U ovom radu korišten je mutiran soj E. coli s deletiranim genom za trioza fosfat izomerazu bez kojeg bakterija ne može rasti na glicerolu. Soj je transfomiran plazmidom koji komplementira mutaciju te ima rezistenciju na antibiotik. Rast mutiranog soja i segregacijska stabilnost plazmida uspoređeni su sa roditeljskim, ne mutiranim sojem, transformiranim istim plazmidom, te uzgajanim u mediju sa i bez antibiotika. Uz to, kreiran je novi auksotrofni soj, sa smanjenom mogućnošću pojave revertanata

• Ključne riječi: E. coli; segregational stability; triosephosphate isomerase
• Ključne riječi (hrvatski): E. coli; segregacijska stabilnost; trioza fosfat izomeraza
• Jezik: engleski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:234166
• Studijski program: Naziv: Bioprocesno inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka bioprocesnog inženjerstva (mag. ing. bioproc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2019-11-26 12:47:48