Razvoj primjene dviju glikozid hidrolaza - ekspresija saharoza fosforilaze na površini S. cerevisiae i praćenje aktivnosti alfa-amilaze

diplomski rad

• Naslov (engleski): Development of the application of two glycoside hydrolases - expression of sucrose phosphorylase on S. cerevisiae surface and monitoring of alpha-amylase activity
• Autor: Stela Lilek
• Mentor: Anita Slavica (mentor)
• Član povjerenstva: Renata Teparić (predsjednik povjerenstva)
• Član povjerenstva: Blaženka Kos (član povjerenstva)
• Član povjerenstva: Jasna Mrvčić (član povjerenstva)
• Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj: Sveučilište u Zagrebu; Prehrambeno-biotehnološki fakultet; (Zavod za biokemijsko inženjerstvo); (Laboratorij za biokemijsko inženjerstvo, industrijsku mikrobiologiju i tehnologiju piva i slada); Zagreb
• Datum i država obrane: 2022-09-30, Hrvatska
• Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana: BIOTEHNIČKE ZNANOSTI; Biotehnologija

Sažetak

U ovome radu je istražena mogućnost primjene dviju glikozid hidrolaza - saharoza fosforilaze i -amilaze. Primjenom odabranih metoda molekularne biotehnologije gen iz bakterije Leuconostoc mesenteroides koji kodira za saharoza fosforilazu (LmSPaza), umetnut je u plazmid pRST423_Ccw12_G i načinjen je konstrukt pRS_Ccw12LmSPaza. Ovi postupci su provedeni uz korištenje bakterijskog soja Escherichia coli DH5α, čije su transformirane stanice rezistentne na ampicilin. Gen koji kodira za LmSPazu insertiran je u konstruktu pRS_Ccw12LmSPaza između dva dijela gena ScCCW12, čime je osigurana uspješna ekspresija ovoga proteina na vanjskoj površini stijenke kvasca S. cerevisiae. LiAc metodom uspješno su konstruktom pRS_Ccw12LmSPaza transformirana dva soja kvasca S. cerevisiae - S. cerevisiae BY4741 i S. cerevisiae SEY6210, a ekspresija LmSPaze potvrđena metodama SDS-PAGE i Western blot. Hidroliza škroba α-amilazom uspješno je popraćena skenirajućom elektronskom mikroskopijom i na ovaj način su potvrđeni rezultati prethodnih istraživanja u ovoj grupi.

Sažetak (engleski)

The use of two glycoside hydrolases - sucrose phosphorylase and -amylase was investigated in this thesis. By applying selected methods of molecular biotechnology, the gene from the bacterium Leuconostoc mesenteroides, coding for sucrose phosphorylase (LmSPase) was successfully inserted into plasmid pRST423_Ccw12_G and the pRS_Ccw12LmSpase construct was made. These procedures were carried out using the bacterial strain Escherichia coli DH5α, whose transformed cells are resistant to ampicillin. The gene that codes for LmSPase were inserted into the pRS_Ccw12LmSPase construct between two parts of the ScCCW12 gene, which ensured the successful expression of this protein on the outer surface of the S. cerevisiae yeast wall. Using the LiAc method, two S. cerevisiae strains - S. cerevisiae BY4741 and S. cerevisiae SEY6210 were successfully transformed with the pRS_Ccw12LmSPase and LmSPase expression was confirmed by SDS-PAGE and Western blot. Hydrolysis of starch by α-amylase was successfully monitored by scanning electron microscopy and in this way, the results of previous research in this group were confirmed.

• Ključne riječi: glikozid hidrolaze; saharoza fosforilaza; -amilaza; Saccharomyces cerevisiae
• Ključne riječi (engleski): glycoside hydrolases; sucrose phosphorylase; -amylase; Saccharomyces cerevisiae
• Jezik: hrvatski
• URN:NBN: urn:nbn:hr:159:993605
• Studijski program: Naziv: Bioprocesno inženjerstvo; Vrsta studija: sveučilišni; Stupanj studija: diplomski; Akademski / stručni naziv: magistar/magistra inženjer/inženjerka bioprocesnog inženjerstva (mag. ing. bioproc.)
• Vrsta resursa: Tekst
• Način izrade datoteke: Izvorno digitalna
• Prava pristupa: Otvoreni pristup
• Datum i vrijeme pohrane: 2023-02-27 11:19:11